Avaliação experimental da vacina BCG e extrato proteico em bovinos, via da expressão citocinas
Universidad Nacional Autónoma de México
Introdução: a tuberculoses bovina (TBb) é um problema grave da saúde publica e da sanidade animal em países em via de desenvolvimento, apresentando prevalências nos sistemas bovinos de leite alcançando cifras por encima de 40 %. Por isto, seu controle se fundamenta em alternativas integrais em sua fonte animal para evitar sua transmissão entre animais e os seres humanos, desde a perspectiva de “Saúde Única”. A opção mais viável para diminuir sua incidência é a vacina, porém, para conseguir com êxito, é necessário determinar as melhores condições para aplicar a vacina e entender os mecanismos imunológicos que oferecem resistência contra Mycobacterium bovis, sendo ela uma bactéria intracelular, é necessário produzir uma resposta Th1, caracterizada pela produção do interferon gamma IFN-g), fator de necroses tumoral alfa TNF-α) e interleucina 12 (IL-12), citocinas responsáveis pela ativação e efeito microbicida dos macrófagos. Neste estudo avaliou-se a eficácia da vacina BCG e o extrato protéico filtrado de cultivo (CFPE) de M. bovis como imunógenos contra a TBb através da análise de produção IFN-g, avaliação da expressão de citocinas Th1 (IFN-g, IL-2), Th2 (IL-4, IL-10) e presença de lesões macroscópicas da necropsia após exposição. Metodologia: 24 bezerras Holstein-Friesian de 6 meses de idade negativas a diferentes provas imunodiagnoticas de TBb se dividiram em 4 grupos (6 bezerras por grupo): controle sem vacina, vacina com BCG, vacina com CFPE de M. bovis AN5 e vacina com CFPE com tratamento prévio IFN-g recombinante. A expressão de citocinas IFN-g, IL-2, IL-4 e IL-10 avaliou-se por RT-PCR e se apresentou com a percentagem de intensidade relativa das bandas correspondentes com respeito ao controlo positivo interno (β-actina), utilizando-se software LabsWorks 4.0. A avaliação da resposta imune celular foi avaliada mediante o produção de IFN-g no cultivo de células estimuladas com PPD bovino e PPD avaliar em diferentes períodos. Resultados: A expressão das citocinas foi diferente entre os grupos de vacinas e controle, no período pós vacinal como pós desafio. A expressão de IFN-g no grupo vacinado com BCG foi maior entre o estímulo antigênico in vitro com o PPD bovino e com o antígeno DipZ no tempo pós vacinação avaliado. No grupo de imunizados com o CFPE, a expressão de IL-4 foi significativa neste período, apresentando maior porcentagem no grupo tratado com o IFN-g. Após o desafio, se incrementou a produção e expressão do IFN-g em todos os grupos; sendo 200 vezes superior para o grupo tratado com IFN-g com diferentes antígenos. Neste grupo a maior expressão do IL-2, IL-4 e IL-10 foi também significativa, apresentando IL-10 maior reconhecida antagonista da imunidade celular. De fato, neste grupo com BCG registrou-se o menor número e grado de lesões no desafio, manifestando-se no obstante menos severas em comparação do grupo controle. Conclusões: no grupo vacinado com BCG mostrou um menor número e grado de lesões, correlacionando com uma produção e expressão significativa do IFN-g. No tratamento prévio com IFN-g no grupo imunizado com CFPE mostrou um efeito adverso no estabelecimento da imunidade protetora devido a uma modelação negativa por parte da IL-4 e IL-10. De acordo com os resultados apresentando a BCG é o melhor imunógeno no estudo, sendo promissório seu uso no controle da doença.
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