Estandarización de una PCR anidada para la identificación de Lawsonia intracellularis en porcinos

Investigación
https://doi.org/10.16925/sp.v10i20.887

Autores/as

Ángela Jiménez Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.
Luz Stella Cortes Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.
Marcela Martinez Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.
Yuliana Silva Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.
Carolina Florez Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.
Marcel Mendez Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.
Anderson Gómez Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.

Se estandarizó una técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa PCR anidada para el diagnóstico de la enteropatía proliferativa porcina causada por la bacteria Lawsonia intracellularis. La técnica se basó en la amplificación de una región de 270 pb del gen 16s arnr de Lawsonia intracellularis; para tal fin, se extrajo el adn de la bacteria mediante el kit Purelink Genomic, Invitrogen®, a partir de 100 muestras de íleon de porcinos provenientes del área metropolitana de Bucaramanga (Santander). Los adn fueron cuantificados por fluorometría y ajustados a una concentración de 20 ng/µL. Se llevó a cabo una primera amplificación de la porción de 319 pb del gen 16s arn con los iniciadores externos: 5’-tat ggc tgt caa aca ctc cg-3’ y 5’-tga agg tat tgg tat tct cc-3’. El producto de esta primera amplificación se usó de molde para una segunda reacción, en la que se amplificó una porción interna de 270 pb del gen 16s arn de L. intracellularis, empleando los iniciadores internos específicos: 5’-tta cag gtg aag tta ttg gg-3’ y 5’-ctt tct cat gtc cca taa gc-3’. Las condiciones óptimas para las pcr tanto con los iniciadores internos como con los externos incluyeron: 2,5 mm de mgcl2; 0,15 mm de cada dntp; 1x de Buffer de reacción; 0,8 µm de cada iniciador; y 2,5 U de Taq polimerasa. Como control positivo tanto en la extracción de adn como en las pcr, se empleó ADN bacteriano extraído de la vacuna Enterisol® (Boheringer Ingelheim®). Las temperaturas óptimas de anillamiento para la pcr simple y anidada fueron de 50 y 55°C, respectivamente. El límite de detección de la técnica fue de 5 fg. La técnica no evidenció reacción cruzada con Esquerichia coli, ni con Salmonella typhimurium, bacterias con cuadros clínicos semejantes.

Palabras clave: ileítis, cerdos, diagnóstico molecular
Artículos más leídos del mismo autor/a
Número
Publicado
2014-06-01

Descargas

Descargas
Los datos de descargas todavía no están disponibles.
Métricas
Cargando métricas ...

Biografía del autor/a

Ángela Jiménez, Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de Colombia, Bucaramanga, Colombia

Luz Stella Cortes, Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de Colombia, Bucaramanga, Colombia

Marcela Martinez, Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de Colombia, Bucaramanga, Colombia

Yuliana Silva, Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de Colombia, Bucaramanga, Colombia

Carolina Florez, Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de Colombia, Bucaramanga, Colombia

Marcel Mendez, Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de Colombia, Bucaramanga, Colombia

Anderson Gómez, Universidad Cooperativa de Colombia. Sede Bucaramanga.

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de Colombia, Bucaramanga, Colombia